2月23日， 由中国生物化学与分子生物学会临床医学专业分会主办，北京医院国家老年医学中心承办，北京恩泽康泰生物科技有限公司和厦门福流生物科技有限公司协办的《第二届细胞外囊泡临床标志物及治疗研讨会》线上直播完美落幕，本次会议在线报名人数近2000人，浏览量5000+，在细胞外囊泡领域热度依旧，受到领域内广泛认可。现在我们总结了会议的精华内容与回放视频，供大家参考。

会议由北京医院、中国生物化学与分子生物学会临床医学专业分会秘书长谭爱国教授开场，介绍了会议的组织方、主席、主持人。来自首都医科大学附属北京天坛医院、中国生物化学与分子生物学会临床医学专业分会主任委员康熙雄教授作开场致辞。来自北京医院柯会星教授、中国医学科学院阜外医院康连鸣教授以及北京华信医院文江平教授共同主持了本次直播。扫描下方二维码即可观看回放。

会议执行主席

会议主席

上半场主持人

下半场主持人

报告一：小细胞外囊泡（sEV/exosome）技术与肿瘤基础和临床研究

来自江苏大学医学前沿研究院院长许文荣教授报告中，许教授用已发表文献的实际案例阐述了小细胞外囊泡能够影响肿瘤的发生发展，参与肿瘤的代谢再编程，并且具体全面的讲解了当前外泌体分离技术、细胞外囊泡表征技术以及细胞外囊泡核酸蛋白检测技术等。强调了外泌体标志物对诊断性能有显著提高。许教授团队在外泌体circRNA作为标志物研究取得了斐然的成果。其能够提高胃癌诊断性能，并与肿瘤转移高度相关以及能够影响肿瘤的发生发展，近两年来已发表多篇相关高水平文章，进一步论证了外泌体在临床疾病标志物研究及治疗中的广阔前景！

报告二：外泌体在肺癌诊疗中的最新研究进展

来自中国医学科学院肿瘤医院郭威医生结合自身研究经历，介绍了近年来外泌体作为标志物在肺癌诊断，转移预测等方面的研究进展。同时对外泌体在肿瘤治疗方面的前景进行了展望，对外泌体药物表现出来的治疗潜力给予了高度的肯定。

报告三：外泌体在精神疾病中的探索和应用

来自昆明理工大学陈凤容教授为我们带来了《外泌体在精神疾病中的探索和应用》精彩报告。报告中，陈教授首先综述了外泌体在神经疾病中的应用研究，在AD和PD以及认知障碍等精神类疾病中外泌体可以作为很好的标志物来源用于疾病诊断，另外在疾病发生和进展过程中外泌体参与了相关信号分子的运输和有效信息传递。接下来，陈教授介绍了自己团队在药物成瘾戒断相关外泌体研究成果，主要说明外泌体内含的sRNA和代谢物可以作为药物成瘾戒断的有效标志物，另外介绍了外泌体作为药物递送载体的优势，有很好的临床转化应用前景。

报告四：外泌体综合表征技术在疾病诊断及治疗中的应用

福流生物应用科学家袁心悦介绍了外泌体在疾病诊断与治疗中的应用前景及难点、结合外泌体的特性，指出外泌体综合表征技术的必要性及表征策略，袁老师分享了纳米流式在结直肠癌、鼻咽癌与鼻咽炎等疾病诊断中的应用场景，同时，还就不同的载药策略分享了三个前沿的研究成果。值得开心的是，纳米流式检测的方法已经进入到《人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡》和《人多能干细胞来源的小细胞外囊泡》的团体标准中，纳米流式未来可期！

报告五：新技术赋能外泌体临床标志物及治疗研究

恩泽康泰技术总监时韦美主要对外泌体领域新技术进行了介绍，从囊泡群体bulk水平检测新技术到单囊泡水平检测新技术，从外泌体标志物研究应用到工程化外泌体载药研究应用，阐述了外泌体新技术如何赋能临床研究和转化，展示了恩泽康泰作为外泌体领域行业先驱在外泌体研究领域的深厚底蕴和前瞻布局。

现场提问与解答

在观众提问环节，由于时间有限，主持人筛选了其中部分问题进行解答，会后我们也选取了部分热点话题邀请专家再次解答，现整理如下：

Q1：针对样本量很少的样本，我们想做一些标志物，您推荐什么技术呢？

如果要做筛选标志物相关的研究，现在的研究需要的样本量还是比较多。我们现在推荐超速离心法和分子排阻法（色谱柱）。

Q2:许教授，外泌体circRNA的诊断很有价值，但是外泌体都是碎片化的，存在检测和验证难度的问题。您推荐时测序还是芯片？相比于外泌体蛋白，两者哪个更适合临床应用？

测序灵敏度高，非特异性多，表达谱芯片也有这样的问题。目前来看，蛋白标志物的特异性和广泛性没有RNA好。RNA测序结果比较多，可选择性比较多，另外还可以联合分析。利用多种分子（RNA和蛋白）联合构成一个panel，形成一组指标进行诊断是未来的一个趋势。

外泌体circRNA是环状的，相比miRNA和lncRNA等更稳定，更容易富集，所以我们最终的经验是做外泌体circRNA。

Q3:为什么现在关于外泌体标志物的研究这么多，转化到临床的却很少，有哪些因素限制了外泌体标志物的临床转化。

要跟现代信息学和计算机辅助相结合应用到临床才会更有价值。从我们现在的研究结果来看，单一指标的临床应用价值是受限制的。复合指标如4个分子的panel应用到临床就需要计算机辅助，甚至可以和其他分子标志物或影响学的指标相结合，对疾病的诊断，预后判断和动态变化监测更有效。另外，也需要进一步推进多中心合作和系列队列研究。

Q4:郭老师，外泌体标志物比如CD63的western blot结果中，分子量往往会高于普通细胞提取的蛋白，在您的结果中也看到了这点，这个现象可能是由于外泌体富集引起，请问您觉得这个对蛋白检测特异性和准确度有影响吗?

CD63是外泌体的标志性蛋白，几乎在所有外泌体表达。所以你富集外泌体以后，外泌体蛋白中的CD63量很大，高于细胞总蛋白中的量。CD63含量占外泌体总蛋白的比例相较于细胞总蛋白来说是很大的。我认为不会对特异性有影响。特异性是基于外泌体本身的性质，可以多做一些验证，减少误差导致的影响。

Q5:肺癌的耐药和外泌体有相关研究吗？

肺癌的耐药与外泌体相关的研究很多，另外，不仅仅是肺癌，在乳腺癌，结肠癌等其他肿瘤中与耐药相关的外泌体研究也很多。可以上PubMed上输入关键词检索，多数研究是从标志物入手，目前也有一些比较前沿的例如靶向治疗或免疫治疗耐药相关的外泌体研究。

Q6:外泌体这么小的结构，神经类疾病病变也不好界定，做精神疾病领域的外泌体研究是否能找到差异分子？ 

刚才的文献里有介绍，外泌体在中枢神经系统的发育、中枢神经损伤、中枢神经系统肿瘤以及神经退行性疾病中都有重要作用，在这些病理/生理过程中如神经细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞等都会分泌外泌体参与这些过程，只要来源细胞状态改变其分泌的外泌体分子就会发生变化。像药物成瘾研究这类病理改变不明显的疾病中，我们的研究结果显示出健康人、药物成瘾者、不同阶段药物成瘾者之间的血浆外泌体RNA、代谢物是存在差异的，而且差异分子还比较多，能够证明神经疾病做外泌体研究的可行性。

Q7:纳米流式可以研究外泌体表面的蛋白，内部的蛋白能否检测？

2018年ACS Nano发表的文章中针对的研究对象是跨膜蛋白，内膜蛋白和膜内蛋白目前也已经开发出相应的研究方法，相关文章也正在准备中。只要选择合适的标记策略和荧光抗体，内部蛋白的检测不是问题。

Q8:纳米流式的标记荧光强度如何转化成蛋白拷贝数？

目前纳米流式的荧光灵敏度可以达到3个有机染料分子，对于PE这种较大的有机染料分子，则可以达到单PE的检测灵敏度，所以我们可以先去检测单个抗体的荧光强度，然后用每个标记了抗体的外泌体总荧光强度除以单个抗体荧光强度，就可以得到每个囊泡表面的具体拷贝数。

Q9：请问福流工程师，EV数量众多，我们之前尝试对其荧光染色时，以细胞染色抗体用量为基础逐渐增加。结果发现抗体量增加，阳性率也增加。请问EV染色抗体用量如何控制？

首先，荧光抗体的标记效果会受到产品本身、样本种类以及标记条件等多方面影响。所以这边建议在使用新的抗体标记时，可以参照产品说明书用量设置梯度，直到标记阳性率检测结果不再增加，此时的抗体用量才是目前抗体标记目前样本的饱和用量。

Q10：请问sEV 标志物研究是利用组织样本好还是用血浆好？

如果是从临床转化的角度来看的话，血浆会更好。但是血浆里的组分混杂，血浆和组织外泌体联用，可以排除血里面的血细胞或其他组织释放出来的一些非特异性的信号的影响。

Q11：请问现在真正单囊泡水平的的检测技术有哪些？

目前常用的单囊泡检测技术，如nanoFCM、ExoView和单分子定位显微镜(SMLM)等平台，基本都是低通量检测技术，一次只能检测几个膜蛋白。目前通量比较高且已经商用的是单囊泡膜蛋白质组学技术。

关于恩泽康泰

北京恩泽康泰生物科技有限公司是致力于外泌体技术开发与临床转化的创新型高科技公司。公司业务分为两个板块，一方面基于自主知识产权的平台提供领先的生命科学研究服务，以外泌体组学平台—Exoomics为核心的高通量多组学解决方案和工程化外泌体改造平台—ModiExo为核心的基础研究解决方案等丰富的产品线，并且围绕客户需求不断推出高效的外泌体研究工具；另一方面是基于核心知识产权的工程化外泌体平台-Echosome赋能外泌体创新药研发，现已建成3000平米外泌体GMP中试车间，并且建立成熟的外泌体生产工艺和质量表征体系，可提供工程化外泌体载体设计开发、工程化外泌体药物PCC开发等CRO服务及工程化外泌体的CDMO服务。公司致力于通过提供系统的外泌体研究与转化解决方案，赋能临床科研，加速临床转化，成为外泌体研究与转化合作伙伴。

关于厦门福流

福流生物自主研发的纳米流式检测仪是目前世界上唯一一款真正具有单个纳米颗粒分析能力的流式产品，可实现外泌体、病毒、细菌等天然生物纳米颗粒以及功能化纳米颗粒的多参数表征，为流式细胞分析技术打开了通往纳米世界的窗口。通过对单个纳米颗粒（7-1000 nm）的粒径及其分布、颗粒浓度以及生物化学性质的高分辨、高选择性、高通量检测，纳米流式检测仪填补了国际空白，客户遍布全球顶级机构，在国际上享有盛誉。如Mayo Clinic、MD Anderson Cancer Center、NIH、牛津大学、帝国理工学院等全球顶尖研究机构和Codiak Biosciences、EVOX、LONZA、Novo Nordisk、百时美施贵宝等高科技生物制药公司均为我们的客户。